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梨种质资源超低温保存

发布人:临沂育果花粉发布时间:2017/7/2

一、种子。没有关于梨种子超低温保存的报告。Stanwood(1985) 建议最耐旱耐液态氮且水分含量在5到10%、冷却速率为 1至30℃/min之间种子有高存活率。如果不损坏测试样本,可以安全地存储整个样本。需要研究以确定可用种质资源集合中的许多梨物种的种子的最佳种子水分含量和冻融率。

二、花粉。梨花粉的许多研究报告显示它长寿命。干梨花粉可以在干燥室温条件下存活(低萌发率)长达9年之久(秋滨和大村,1986年)。Visser (1955 年)在各种温度和相对湿度的条件下做了广泛的梨花粉存活研究,发现在-196℃下梨花粉的发芽能力可以保持2-3年。秋滨(1978 年) 成功地低温保存并干冻化梨花粉,发现干燥存储的梨花粉在授粉前的再水化是很重要的。那些在液态氮中储存了三年以及在6小时的的5℃,90%相对湿度下复水的花粉均成功授粉,Craddock (1987)低温储存了很多来自各种梨品种的花粉。他发现在解冻后花粉管发芽上的一些变异,但总体上时好的变异结果。Craddock收集了还未开放的、处于“爆米花阶段”的樱花,并且用密闭筛从花上分离了花药;未裂开的花药一夜之间在实验台上干燥开裂。风干后的花粉初始含水量(MC)是25%到35%,并有85%到95%的萌发率。花粉在液态氮中暴露后含水量在5%-30%之间的反映出最大活性,而有这一含水量的花粉的适度萌芽率高达90%。花粉花药混合物在经过24小时干燥后可以进行低温储存,在低温储存之前也可以在5℃的干燥器内储存。Chen等人发现(1993年)在每此花粉被冻结时如果水分含量仍然较低(10 至 20%),那么在几个冻结/解冻周期后梨花粉仍然可用,甚至还成功的进行了授粉。体外萌发也可能用于可行性测试(Towill,1985年)。

显微镜下的梨花粉

三、休眠芽。酒井和西山 (1978 年) 第一次证明hardy梨休眠芽在-40℃-50℃的预冷后可以在液态氮中生存。被测试的四分之五的品种有高存活率(78 到 100%)和高发芽率,虽然所有品种的木质部均受到严重伤害。日本的一些实验室已经研究了从休眠芽上切取的茎尖的冷冻保存(Moriguchi et al., 1985; Oka et al., 1991; Mi and Sanada, 1992, 1994)。Moriguchi等人(1985)和Moriguchi(1995)报告要想成功的冷冻保存从日本梨[P. serotina Rehd. var. culta cv. Kosui; synonym of P. pyrifolia (Burro. f.) Nakai]的休眠芽上截取的茎尖部二甲基亚砜(dmso)的预处理和-40℃至-70℃的预冷处理时必须的。其他的冷冻保护剂并不是必须的,而且在没有复温过程的应用下80%的茎尖可以生存。Oka等人(1991)在冻存的“Senryo”冬芽中发现了一些完整的植物,但嫁接后芽结构的整体频率较低(0%-8%)。Suzuki等人(1997年)将冬梨(Pyrus communis L. cv. Beurre d'Amanlis and 其他12个梨基因型)的芽脱水、低温处理,最后微嫁接到具有良好再生能力的砧木上。

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